VPAHPND毒力蛋白PirAB的原核表达与纯化

作者：范贤平; 张晟; 蒋葛; 曹晓慧; 乔毅; 成婕; 徐军田; 胡闯显; 沈辉^*

来源：广西科学, 2022, 29(06): 1103-1110.

DOI：10.13656/j.cnki.gxkx.20230110.010

• AHPND
• pirAB基因
• 毒力蛋白
• 副溶血弧菌
• 原核表达

急性肝胰腺坏死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease, AHPND)是一种新型对虾病害，其病原为一类携带编码二元毒素蛋白PirAB的弧菌(VPAHPND),可感染对虾且致死率高。本研究利用GenBank公布的pirAB全基因序列设计特异性引物，通过PCR获得目的基因pirA、pirB、pirAB并克隆至表达载体pET 21b(+)中，构建BL21-pET21b-pirA、BL21-pET21b-pirB、BL21-pET21b-pirAB原核表达体系；通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化，分析重组蛋白的最佳表达条件；采用Ni磁珠对重组蛋白进行纯化，并以Western-blot方法分析其抗原性。结果表明，PirA、PirB、PirAB的重组蛋白分子质量分别约为17 kDa、50 kDa和(50+17) kDa,与预期大小一致。重组蛋白的最佳诱导条件：IPTG浓度0.01 mmol/L,PirA和PirAB 30℃诱导24 h、PirB 30℃诱导4 h,蛋白均呈现可溶性表达；纯化后的重组蛋白具有较好的反应原性，可为下一步的抗体制备和AHPND致病机理研究提供充足的实验材料。

• 单位
  江苏省海洋水产研究所