非洲爪蛙Klf4基因新转录本的克隆及功能研究

作者：曹青; 徐西兵; 刘浩; 刘晨^*

来源：生物技术, 2019, 29(06): 519-524.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.06.0085

• Klf4
• 转录本
• 非洲爪蛙
• 早期胚胎发育

[目的]克隆非洲爪蛙Klf4基因的新转录本,并研究其在早期胚胎发育中的功能。[方法]提取胚胎总RNA,反转录构建c DNA文库。从Xenbase数据库中获得Klf4的基因组序列,分析序列发现新的ATG位点,设计引物、PCR扩增,将扩增的目的片段插入p CS2+,插入位点为EcoRⅠ和XhoⅠ。经双酶切和测序鉴定,发现载体中插入的目的片段为编码483个氨基酸的Klf4的新转录本。体外转录获得mRNA,显微注射入胚胎,进行表型分析以及原位杂交检测。[结果]成功克隆出了Klf4基因的新转录本;过表达该转录本,表型分析发现胚胎发育异常,原位杂交检测发现Xag2和Dkk1的表达上升。[结论]成功克隆编码483个氨基酸的Klf4基因的新转录本,过表达该转录本胚胎发育异常,Xag2和Dkk1的表达被激活。

• 单位
  河南科技大学; 南京医科大学