青天葵ISSR-PCR体系优化及引物筛选

作者：周雨晴; 杜沛霖; 傅鹏; 谢峰; 王跃峰; 朱华^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2014, 20(21): 95-99.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.2014210095

• 青天葵
• 简单重复序列区间
• 体系优化
• 引物筛选

目的:建立适合青天葵遗传差异分析的简单重复序列区间(ISSR)-聚合酶链式(PCR)反应体系。方法:采用正交试验设计对影响青天葵ISSR-PCR反应体系的5种因素(dNTP、模板DNA、引物、Mg2+和Taq DNA聚合酶)4个水平进行优化,并结合新复极差法,对试验中各单因素进行分析。结果:确立了青天葵最佳反应体系,即在20μL的总反应体积中含有10×PCR buffer 2μL,dNTP 225μmol·L-1,Mg2+2.5 mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.0 U,模板DNA60 ng;从100条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。结论:建立的青天葵ISSR-PCR反应体系,经过24份青天葵样品检验,得出该体系稳定可靠,可用于青天葵遗传差异分析。

• 单位
  广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室; 广西中医药大学; 桂林医学院