结缔组织生长因子反义寡核苷酸对肾小管上皮细胞胶原分泌的影响

作者：张海燕; 李幼姬; 杜勇; 梁鸣; 李晓艳; 余学清; 叶任高

来源：中华肾脏病杂志, 2004, (02): 46-50.

• 结缔组织生长因子
• 反义寡核苷酸
• 肾小管
• 上皮细胞
• Ⅰ型胶原

目的比较结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸两种导入方法的优缺点,观察CTGF反义寡核苷酸对TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞胶原分泌的影响。方法分别用脂质体包裹和未包裹的CTGF反义寡核苷酸(分高剂量和低剂量)处理NRK52E肾小管上皮细胞,观察异硫氰酸荧光素(FITC)荧光标记的反义寡核苷酸的导入情况和细胞的生长状态。采用RT-PCR和Western印迹方法检测CTGF和Ⅰ型胶原的表达。结果脂质体包裹有助于反义寡核苷酸的导入,于6h～9h细胞即出现生长抑制,形态改变。直接导入法反义寡核苷酸进入较慢,在96h内仍未出现明显细胞毒性。直接导入法中,反义寡核苷酸处理48h后,高、低剂量组CTGFmRNA和蛋白大部分受抑,72h时低剂量组CTGF的表达有少量的恢复。TGF-β1刺激能够显著增加Ⅰ型胶原分泌,加入CTGF反义寡核苷酸共同孵育48h,可以大部分取消TGF-β1的作用,而正义和错义的寡核苷酸没有作用。结论反义寡核苷酸直接导入细胞较慢,但仍然能够达到较好的抑制效果,且细胞毒性小,可以用于体外反义技术的研究。CTGF反义寡核苷酸能够抑制TGF-β1引起的肾小管上皮细胞胶原Ⅰ型分泌增多,表明阻断CTGF可能是延缓肾间质纤维化的有效手段。

• 单位
  中山大学附属第一医院; 佛山市第一人民医院