蛋白激酶Cδ在高糖致人脐静脉内皮细胞周期阻滞和凋亡中的作用及机制

作者：孙芳; 周波; 林雪波; 陈芳芳

来源：解放军医学杂志, 2009, (10): 1155-1159.

• 蛋白激酶Cδ
• 脐静脉
• 内皮细胞
• 葡萄糖
• 细胞周期阻滞
• 细胞凋亡

目的探讨蛋白激酶C(PKC)δ在高糖诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)周期阻滞和凋亡中的作用及机制。方法实验按以下分组方式处理细胞:正常葡萄糖对照组(NG,D-葡萄糖5.6mmol/L),Ad5-null转染+正常葡萄糖培养组(NN,D-葡萄糖5.6mmol/L),高糖培养组(HG,D-葡萄糖25mmol/L),Ad5-PKCδ转染+高糖培养组(PHG,D-葡萄糖25mmol/L),Ad5-PKCδ转染+高糖+PKCδ抑制剂Rottlerin处理组(PHR,10μmol/LRottlerin)。激光共聚焦显微镜下观察高糖刺激的PKCδ表达变化,流式细胞技术检测各组细胞周期分布、凋亡率。免疫印迹检测磷酸化叉头蛋白O1(p-FOXO1)(S256)及P27kip1蛋白表达水平。结果与NG组比较,NN组的空载体转染对细胞无明显生物学意义(P>0.05)。与NG组比较,HG组PKCδ在HUVECs内的表达显著增加,细胞质与细胞核荧光比值下降,细胞G0/G1期阻滞增加,凋亡率上升,p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平升高(P<0.05)。与HG比较,PHG组过表达PKCδ后,细胞质与细胞核荧光比值明显下降(P<0.05),G0/G1期阻滞增加,凋亡率上升(P<0.05),p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平进一步升高(P<0.05)。与PHG组比较,PHR组特异性抑制PKCδ活性后,细胞质与细胞核荧光比值增加(P<0.05),细胞周期阻滞及凋亡改善,p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平降低(P<0.05)。结论高糖负荷可使HUVECs中PKCδ表达增加并发生核转位激活,导致p-FOXO1(S256)及P27kip1蛋白水平升高,使细胞阻滞于G0/G1期并发生凋亡。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院