hVEGF siRNA抑制A549细胞在裸鼠移植瘤的早期生长及血管新生

作者：刘容; 马文江; 周建娅; 杨光迪; 周建英

来源：浙江大学学报(医学版), 2009, 38(2): 136-144.

DOI：10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.004

• RNA
• 小分子干扰
• 肿瘤/治疗
• 血管内皮细胞生长因子
• 移植肿瘤
• 鸡胚尿囊膜试验
• 新生血管
• 基因治疗

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(human vascular endothelial growth factor,hVEGF)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对A549细胞裸鼠移植肿瘤生长以及对鸡胚尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)上诱导新生血管的影响.方法:分别构建3个表达不同特异性hVEGF siRNA序列的质粒载体,与表达无关序列siRNA质粒载体分别转染A549细胞,用ELISA与realtime RT-PCR选出抑制hVEGF效果最佳的hVEGF siRNA质粒.G418筛选出稳定表达抑制效果最佳的hVEGF siRNA和表达无关序列siRNA的A549细胞,与未转染的A549细胞分别注射于裸鼠皮下,观察3组细胞在裸鼠皮下成瘤及肿瘤生长的速度.鸡胚尿囊实验:孵育至第9天的白皮受精种蛋随机分为4组,分别在鸡胚尿囊膜表面加未培养过A549细胞的DMEM培养液(阴性对照组),未转染的A549细胞培养上清液(阳性对照组),转染hVEGF siRNA的A549细胞培养上清液(hVEGF siRNA组),转染无关序列siRNA的A549细胞培养上清液(无关序列siRNA组),继续孵育48 h,取固定后的鸡胚绒毛尿囊膜于显微镜下计数血管分支点和血管分支长度.结果:hVEGF siRNA使A549细胞表达mRNA水平最大下降70%,分泌hVEGF水平最大下降48%.在裸鼠移植瘤模型中,hVEGF siRNA组比无关序列siRNA组肿瘤平均体积减少58%,肿瘤生长到50 mm3的平均时间延迟5.4 d,移植肿瘤组织匀浆hVEGF含量降低54%;而肿瘤的倍增时间与肿瘤生长速率差异不显著.在鸡胚尿囊膜实验中,阴性对照组加样液的hVEGF含量为0,hVEGF siRNA组加样液的hVEGF含量约占无关序列siRNA组和阳性对照组的40%～44%;血管分支点计数,hVEGF siRNA组,无关序列siRNA组与阳性对照组比阴性对照组增加45%～55%;血管分支总长度hVEGF siRNA组比阴性对照组增加约53%,无关序列siRNA组和阳性对照组比阴性对照组分别增加约97%及99%.CAM血管图上与阴性对照组比较VEGF siRNA组可见增多的血管分支,阳性对照组和无关序列siRNA组上还可以见血管分支增粗、增长.结论:构建并证实质粒介导的hVEGF siRNA能抑制A549细胞分泌VEGF,从而抑制A549细胞诱导鸡胚尿囊膜的血管新生.在裸鼠移植瘤模型中,hVEGF siRNA能抑制肿瘤早期生长,对肿瘤后期的生长速率无显著抑制.

• 单位
  浙江大学