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摘要
为制备禽多瘤病毒(avian polyomavirus，APV)VP4蛋白单克隆抗体，初步建立APV的间接免疫荧光检测方法，本研究通过原核表达APV VP4蛋白，纯化后免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体，以制备的VP4单克隆抗体为一抗，FITC-山羊抗小鼠IgG为二抗，优化反应条件。结果表明，筛选获得15株阳性细胞株，经亚型鉴定，其中2株单克隆抗体的重链为IgG2b类型，13株重链为IgG1类型，轻链均为κ型。选择3株细胞制备单克隆抗体，这3株抗VP4单克隆抗体浓度分别为2.9 、2.6 、3.2 mg/mL；亲和常数分别为1.06×1010、2.95×109、9.60×109。其中两株效价均为1∶204 800，另一株的效价为1∶51 200。经Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定，这3株单克隆抗体均能与APV发生特异性反应；本研究建立的间接免疫荧光检测方法的最适条件为：Anti-A-VP4-15 1∶1 000倍稀释，4 ℃条件下过夜孵育，二抗1∶200稀释，37 ℃条件下孵育1 h。以建立的方法检测细胞中的减蛋综合征病毒(EDSV)、网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和APV，只有APV的检测结果显示阳性，检测其他病毒的结果均为阴性。应用该单克隆抗体建立的间接免疫荧光方法在细胞上能检出至少5 TCID50 APV感染。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接免疫荧光方法为APV感染的流行病学调查和实验室诊断奠定了基础。
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