HT-2毒素对软骨细胞SIRT1及自噬与凋亡通路相关蛋白表达的影响

作者：李春辉; 王玥; 刘宇蛟; 李佳鑫; 张鑫; 于钧^*

来源：中华地方病学杂志, 2021, 40(09): 705-711.

• HT-2毒素
• 沉默信息调节因子1
• 自噬
• 凋亡
• 软骨细胞

目的探讨HT-2毒素对体外培养软骨细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)及自噬与凋亡通路相关蛋白表达的影响。方法采用体外培养方法, 取1～2日龄SD乳鼠第三代软骨细胞, 采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫荧光染色法进行细胞鉴定;CCK-8法检测软骨细胞增殖情况, 根据细胞存活率选取2、4、8 ng/ml HT-2毒素用于后续实验, 确定作用时间为48 h, 同时设立阴性对照组和溶剂(无水乙醇)对照组。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞SIRT1及自噬与凋亡通路相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62、Beclin1、Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-Associated X的蛋白质(Bax)]的表达情况。结果经染色, 细胞鉴定为软骨细胞且纯度较高。2、4、8 ng/ml HT-2毒素组SIRT1蛋白表达水平(0.69 ± 0.18、0.46 ± 0.13、0.35 ± 0.19)均明显低于阴性对照组(1.00 ± 0.39, P均< 0.05);2、4、8 ng/ml HT-2毒素组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ蛋白表达比值(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ, 1.47 ± 0.15、1.37 ± 0.13、1.81 ± 0.34)均高于阴性对照组(1.00 ± 0.21, P均< 0.05), 4、8 ng/ml HT-2毒素组p62蛋白表达水平(0.70 ± 0.04、0.57 ± 0.01)均低于阴性对照组(1.00 ± 0.15, P均< 0.05)。2、4、8 ng/ml HT-2毒素组凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达水平(0.61 ± 0.06、0.54 ± 0.16、0.47 ± 0.06)均明显低于阴性对照组(1.00 ± 0.14, P均< 0.05), 且8 ng/ml HT-2毒素组Bax与Bcl-2蛋白表达比值(Bax/Bcl-2, 3.27 ± 0.18)高于阴性对照组(1.00 ± 0.27, P < 0.05)。SIRT1蛋白表达水平与自噬相关蛋白LC3-Ⅱ蛋白表达水平呈显著性负相关(r = - 0.819, P < 0.01), 与p62蛋白表达水平呈显著性正相关(r = 0.772, P < 0.01), 但与Beclin1蛋白表达水平未见相关性(r = 0.399, P > 0.05);SIRT1蛋白表达水平与凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白表达水平均未见相关性(r = - 0.297、- 0.284, P均> 0.05), 但与Bcl-2蛋白表达水平呈显著性正相关(r = 0.755, P < 0.01)。结论 HT-2毒素可能通过抑制SIRT1的表达造成软骨细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高、p62蛋白表达下降, 凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2升高, 从而导致细胞自噬和细胞凋亡异常, 最终导致软骨细胞损伤。

• 单位
  中国疾病预防控制中心; 哈尔滨医科大学