RGS5过表达腺病毒载体构建及其在神经元发育中作用的初步研究

作者：赵崴; 刘传亮; 徐昊; 李高驰; 王金彩^*

来源：国际免疫学杂志, 2022, 45(01): 21-26.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4394.2022.01.004

• 腺病毒
• G蛋白信号调节蛋白5
• 神经元
• 载体构建

目的利用AdEasy腺病毒载体系统构建G蛋白信号调节蛋白5(regulator of G-protein signaling 5, RGS5)重组腺病毒载体, 初步探讨RGS5在神经元发育过程中的作用。方法以C57BL/6小鼠大脑皮层神经元cDNA为模板, 利用PCR扩增RGS5基因, 构建腺病毒重组质粒pAD-Track-RGS5。重组质粒pAD-Track-RGS5经PacI酶切线性化后与pADEasy-1骨架质粒共同转化BJ5183感受态细胞, 筛选重组成功的质粒, 命名为pAD-RGS5。用293A细胞包装重组腺病毒AD-RGS5, 并纯化病毒, 以pAD-Track包装的腺病毒(AD-EGFP)作为对照组检测重组腺病毒RNA水平RGS5表达情况。将重组腺病毒AD-RGS5感染培养的原代皮层神经元, 以AD-EGFP作为对照组检测RGS5对原代皮层神经元发育的影响。结果与Neuro 2a、CATH.a和C17.2细胞系比较, 大脑原代皮层神经元RGS5相对表达量明显升高, 差异具有统计学意义(t值分别为7.40、7.58和7.60, P值均<0.05)。pAD-Track-RGS5转染Hela细胞中RGS5表达量较pAD-EGFP组明显升高, 差异显著具有统计学意义(t=7.58, P<0.05), 成功构建了过表达RGS5基因的腺病毒载体。与AD-EGFP腺病毒组相比, AD-RGS5腺病毒组神经元对突触囊泡内吞的能力变弱, 荧光染色变弱, 差异具有统计学意义(t=5.372, P<0.05), 提示RGS5对皮层神经元的突起发育具有明显的抑制作用。结论成功构建了RGS5过表达的AD-RGS5腺病毒载体, RGS5对原代皮层神经元胞吞突触囊泡的能力有抑制作用。

• 单位
  深圳市龙岗区妇幼保健院; 哈尔滨医科大学; 中心实验室