褪黑素对鸡成骨细胞增殖和分化的影响

作者：王涵; 岳巧娴; 许利军; 周荣艳^*; 陈烨; 陈辉; 张振红

来源：中国兽医学报, 2020, 40(03): 634-640.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.31

• 细胞分离
• 褪黑素
• 成骨细胞
• 增殖
• 分化

采用组织块贴壁法分离鸡成骨细胞并进行体外培养,细胞纯化后经姬姆萨、甲苯胺蓝、碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色鉴定;在成骨细胞培养液中分别添加0,10,50,100μmol/L褪黑素,连续14 d测定成骨细胞增殖情况;在第1,3,7,14天测定诱导分化培养的成骨细胞ALP活性,并在第14天检测成骨细胞BSP基因表达水平。甲苯胺蓝染色结果与小鼠胚胎成骨细胞前体细胞系MC3T3-E1一致;ALP染色呈阳性,可见大量黑色颗粒;茜素红染色后矿化结节呈深红色。成骨细胞ALP活性在第3天有所降低,但随培养时间延长,ALP活性逐渐升高;添加褪黑素对细胞增殖的影响差异不显著(P>0.05),但在第1天和第14天显著提高成骨细胞ALP活性(P<0.05);添加褪黑素提高了BSP基因的相对表达量(P=0.09)。结果表明,利用组织块贴壁法,分离得到鸡颅骨成骨细胞,确定了褪黑素促进成骨细胞分化,且具有时间和浓度依赖性,但不影响增殖。

• 单位
  河北农业大学; 动物科技学院