E2F1的siRNA真核表达载体转染对胆管癌细胞的作用

作者：汪昕; 唐滔; 陈波; 苏瑛; 邹声泉

来源：中国普通外科杂志, 2008, (02): 130-133.

DOI：10.3969/j.issn.1005-6947.2008.02.008

• 胆管肿瘤
• 转录因子
• E2F1
• siRNA
• 真核表达载体 Bile Duct Neoplasms
• Transcription Factors
• E2F1
• siRNA
• Eukaryotic Expression Vector

目的探讨E2F1蛋白信号的转导通路对胆管癌细胞凋亡的影响中的作用。方法根据E2F1基因cDNA序列,设计针对目的基因的4个siRNA靶序列,将其插入U6启动子下游,克隆到真核表达载体pGsensil中,通过酶切鉴定和DNA测序鉴定。采用脂质体介导法将构建好的4个siRNA表达载体分别转染于QBC939细胞中;以RT-PCR检测E2F1基因在转染前后的表达,流式细胞术检测转染后对细胞凋亡率的影响。结果重组质粒酶切后呈线性化,酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。转染48h后,4个siRNA表达载体均抑制了E2F1 mRNA的表达,沉默E2F1基因后细胞的凋亡率显著增加。结论E2F1的siRN...

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 广东省深圳市龙岗中心医院