融合疏水蛋白在毕赤酵母中的表达及其性质研究

作者：许丹云; 王维; 马爱民^*

来源：轻工学报, 2018, 33(06): 71-81.

• 融合疏水蛋白
• 毕赤酵母
• 转化子
• 响应面分析
• 乳化性
• 起泡性

运用基因改造方法,将不同来源的Ⅰ型疏水蛋白基因(平菇的Po. hyd1和香菇的Le. hyd)拼接后,构建融合表达载体p PIC9k-Po. hyd1-Le. hyd,并将其电转化到毕赤酵母GS115感受态细胞中,经PCR验证和遗传霉素G418的抗性筛选,得到3个高效表达的毕赤酵母转化子;运用三氟乙酸方法分离纯化发酵上清液中的融合疏水蛋白Po. hyd1-Le. hyd,经检测其单体分子量约为26 k D.运用单因素试验和响应面分析试验优化,得到毕赤酵母转化子的最佳诱导表达条件为碳源(甲醇)质量分数为0. 62%,氮源(m(酵母提取物)∶m(蛋白胨)=1∶2)质量浓度为8. 39 g/L,发酵培养基的初始pH值为6. 05,YNB质量浓度为100 mg/L,装液量为50 m L,初始OD600值为1. 2.此时融合疏水蛋白Po. hyd1-Le. hyd的产量最高可达30 mg/L.对融合疏水蛋白Po. hyd1-Le. hyd起泡性和乳化性的研究发现,其蛋白性质均优于从平菇菌丝中提取的疏水融合蛋白.

• 单位
  华中农业大学