miR-30a通过靶向调控Beclin-1、ATG5影响食管癌细胞自噬及增殖过程

作者：苏培渊; 杨清; 付兵; 陈岳威; 徐浩然; 黄文辉

来源：中国免疫学杂志, 2022, 38(24): 3013-3024.

• miR-30a
• Beclin-1
• ATG5
• 食管癌
• 自噬

目的：探究miR-30a通过靶向调控Beclin-1、ATG5表达对食管癌细胞自噬及增殖过程的影响。方法：靶基因预测、双荧光素酶报告实验验证miR-30a对Beclin-1、ATG5的靶向调控作用。GEO、Human Protein Atlas和GEPIA在线分析TCGA数据库和GTEx项目中食管癌组织及癌旁组织miR-30a、Beclin-1、ATG5表达、患者预后生存期。免疫组化检测45例食管癌及癌旁组织标本Beclin-1、ATG5表达，并分析Beclin-1、ATG5表达与患者临床病理参数的关系。采用脂质体LipofectamineTM3000将靶向Beclin-1、ATG5的miR-30a-mimic转染至Eca-109细胞，体外常规培养并分为3组：未转染组（control组）、转染无义RNA的阴性对照组（mimic NC组）、转染miR-30a-mimic的干扰组（miR-30a组）。MTT和克隆形成实验测定细胞增殖活力；qRT-PCR检测miR-30a、Beclin-1、ATG5 mRNA表达；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭；Western blot检测Beclin-1、ATG5、LC3Ⅱ、p62蛋白表达。透射电镜观察细胞自噬泡形成情况。结果：生信分析结果显示，食管癌组织中miR-30a表达高于正常组织，Beclin-1、ATG5表达低于正常组织，且预后生存期与miR-30a表达呈负相关，与Beclin-1、ATG5表达呈正相关（P<0.05）。与control组和mimic NC组相比，miR-30a组细胞增殖、迁移和侵袭能力、p62蛋白表达明显升高，Beclin-1、ATG5、LC3Ⅱ表达、细胞自噬活力明显降低（P<0.05）。而control组与mimic NC组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论：miR-30a靶向调控Beclin-1、ATG5表达；Beclin-1、ATG5在食管癌组织和细胞中表达均降低，具有肿瘤抑制基因作用，可能通过抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭、促进自噬发挥抑癌作用，为通过靶向调控自噬途径治疗食管癌提供了新思路。

• 单位
  成都中医药大学附属医院