草酸青霉可重复利用筛选标记5'氟乳清酸的构建

作者：苏丹; 凌小翠; 秦秀林^*; 冯家勋

来源：基因组学与应用生物学, 2021, 40(02): 713-719.

DOI：10.13417/j.gab.040.000713

• 草酸青霉
• 无筛选标记系统
• pyrG
• 反向筛选

草酸青霉是纤维素酶高产真菌,也是科学研究的重要真菌之一。借助基因工程技术手段对工业真菌进行分子改造,可以有效提高菌株在工业生产中的经济效益,对工业菌株进行基因改造需要大量的筛选标记,目前草酸青霉中可用的筛选标记较少,因此需要构建一个草酸青霉可重复利用筛选标记转化系统。本研究构建以乳清酸核苷-5’-磷酸脱羧酶基因(pyrG)作为选择标记,以草酸青霉pyrG缺失菌株为宿主菌构建转化系统。首先,构建了含有草酸青霉pyrG表达框及其终止子TT1重复序列的可重复利用pyrG筛选标记。然后,以pyrG筛选标记作为选择标记,以草酸青霉pyrG缺失菌株△ku70△pyrG (pyrG::kan)为受体菌株,敲除△ku70△pyrG (pyrG::kan)菌株中的kan基因,获得菌株△ku70△kan (kan::R-pyrG)。最后,利用筛选标记中的pyrG终止子重复序列发生自我剪切,利用氟乳清酸(5-FOA)的筛选,获得pyrG缺失,kan抗性基因缺失菌株△ku70△R-pyrG。本研究成功建立以pyrG为筛选标记,草酸青霉pyrG缺失菌株为受体菌的可重复利用筛选系统。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室