人颗粒溶素活性肽和小鼠单链白细胞介素-12重组卡介苗的构建及鉴定

作者：张黎; 王瑜伟; 何永林; 帖儒修

来源：中国生物制品学杂志, 2009, 22(06): 556-559.

• 颗粒溶素
• 白细胞介素-12
• 重组卡介苗
• 真核表达

目的构建含人颗粒溶素(GLS)活性肽和小鼠单链白细胞介素-12(mIL-12)基因的重组卡介苗(BCG),并鉴定其向真核细胞递呈质粒的能力。方法以分子生物学方法构建含相对分子质量为9000的颗粒溶素活性肽基因和小鼠IL-12基因及分枝杆菌复制子OriM的真核穿梭共表达质粒pBM9,以电转化的方式将pBM9质粒转入BCG,构建重组BCG,抽提质粒进行PCR鉴定;将重组菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,经RT-PCR检测重组菌向真核细胞递呈质粒的能力。结果重组BCG可扩增出与GLS基因和mIL-12基因相符的目的条带。重组BCG感染RAW264.7细胞96h后,经RT-PCR可扩增出267bp的GLS基因条带和1632bp的mIL-12基因条带。结论已成功构建含GLS和mIL-12基因的重组BCG,该重组BCG能向小鼠巨噬细胞递呈携带的目的基因。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆医科大学