重组BMP7真核表达载体的构建及其对关节软骨细胞的转染

作者：曲福军; 侯宜; 戚良晨; 刘丽玲; 池光范; 侯立中

来源：吉林大学学报(医学版), 2005, 31(6): 819-823.

DOI：10.3969/j.issn.1671-587X.2005.06.001

• 基因转染
• 软骨细胞
• 骨形成蛋白-7
• 真核表达载体

目的:构建pcDNA3.1-BMP7真核表达载体,并探讨转染关节软骨细胞的脂质体和DNA的最佳比例及BMP7基因表达.方法:构建pcDNA3.1-BMP7真核表达载体.用脂质体将pcDNA3.1-BMP7包裹形成DNA脂质体复合物,转染家兔关节软骨细胞,G418筛选.转染过程中确定脂质体浓度、脂质体与pcDNA3.1-BMP7质粒的比例.原位杂交、PCR、Western blotting测定BMP7表达.结果:构建了pcDNA3.1-BMP7真核表达载体,脂质体与pcDNA3.1-BMP7质粒最佳转染浓度为3 mL培养液中加10μL脂质体和4μgpcDNA3.1-BMP7质粒(2.5:1);以400 mg·L-1G418的正常培养液筛选28 d,BMP7为阳性表达.结论:在脂质体介导下,pcDNA3.1-BMP7转染家兔关节软骨细胞获得成功,且BMP7在该细胞中稳定表达.

• 单位
  药物研究所; 吉林大学中日联谊医院; 吉林大学; 哈尔滨医科大学附属第二医院