miR-486-5p/PINK1通路调控线粒体自噬拮抗SK-N-SH细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤

作者：蔡利; 兰蕾^*; 徐胜波; 陈湘闻; 杨鸿; 黄东振

来源：重庆医学, 2023, 52(10): 1448-1459.

• 卒中
• 微RNA-486-5p
• PINK1
• 线粒体自噬
• 氧糖剥夺/复糖复氧
• 缺血-再灌注损伤

目的 探究微RNA-486-5p/PTEN诱导激酶1(miR-486-5p/PINK1)通路调控线粒体自噬对SK-N-SH细胞糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的影响及机制。方法 实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测45例缺血性卒中(IS)患者和45例健康体检者血清miR-486-5p表达。双荧光素酶报告基因验证SK-N-SH细胞中miR-486-5p对PINK1的靶向关系。取对数生长期SK-N-SH细胞分为：Control、OGD/R、OGD/R+miR-486-5p mimic、OGD/R+miR-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率，RT-qPCR检测miR-486-5p、PINK1、帕金蛋白(Parkin) mRNA表达，Western blot检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62、Beclin1、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素C(CytC)蛋白表达，流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)含量及细胞凋亡率。结果 IS组患者血清miR-486-5p表达较健康体检者明显降低(P<0.01)。miR-486-5p可以结合PINK1的3′端非编码区(P<0.01)。与Control组比较，OGD/R组细胞miR-486-5p、p62的表达及细胞存活率明显降低(P<0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC的表达及细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。与OGD/R组比较，OGD/R+miR-486-5p mimic组细胞miR-486-5p、p62的表达及细胞存活率明显升高(P<0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC的表达及细胞凋亡率明显降低(P<0.001)。与OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC组比较，OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组细胞miR-486-5p、p62的表达及细胞存活率明显降低(P<0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC的表达及细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。结论 miR-486-5p可拮抗SK-N-SH细胞OGD/R损伤，可能与抑制PINK1/Parkin通路进而抑制线粒体自噬有关。

• 单位
  广西国际壮医医院