微小RNA-509-3p促进氧化型低密度脂蛋白诱导的小鼠主动脉内皮细胞凋亡

作者：张蕊; 宋衍秋; 赵福梅; 刘婷; 丛洪良^*; 赵辉

来源：中华危重病急救医学, 2023, 35(12).

• 动脉粥样硬化
• 内皮细胞
• 凋亡
• 脂蛋白
• Bcl-2
• 微小RNA-509-3p

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)对动脉粥样硬化血管内皮细胞凋亡的影响。方法将小鼠主动脉内皮细胞(MAEC)分为正常对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、miR-509-3p过表达组、miR-509-3p过表达对照组、miR-509-3p抑制剂+ ox-LDL组、miR-509-3p抑制剂对照+ ox-LDL组。在MAEC中加入100 mg/L ox-LDL诱导24 h后, 加入miR-509-3p过表达/抑制剂及相应对照转染48 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ox-LDL诱导的MAEC miR-509-3p表达, 流式细胞仪检测细胞凋亡水平, 细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。应用生物信息学分析预测miR-509-3p的直接基因靶点, 并使用双荧光素酶报告基因检测确认。分别用RT-qPCR和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果 ox-LDL刺激后, MAEC miR-509-3p表达较正常对照组显著上调(1.68±0.85比1.00±0.30, t=2.398, P<0.05)。miR-509-3p过表达转染MAEC后, BCL2 3’’非翻译区(3’’UTR)野生型(WT)报告基因的荧光素酶活性较miR-509-3p过表达对照组显著降低(0.83±0.06比1.00±0.07, t=4.531, P=0.001);而BCL2 3’’UTR突变型(MUT)报告基因的荧光素酶活性与miR-509-3p过表达对照组差异无统计学意义(0.94±0.05比1.00±0.08, t=1.414, P=0.188)。与正常对照组和miR-509-3p过表达对照组比较, miR-509-3p过表达组转染MAEC后细胞增殖活性降低〔(0.60±0.06)%比(1.00±0.09)%、(0.89±0.04)%, 均P<0.01〕, 细胞凋亡率增加〔(23.46±2.02)%比(7.66±1.52)%、(10.40±0.78)%, 均P<0.05〕, Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低(Bcl-2 mRNA相对表达:0.52±0.13比1.00±0.36、1.10±0.19, Bcl-2蛋白相对表达:0.42±0.07比1.00±0.11、0.93±0.10, 均P<0.01)。与ox-LDL组比较, 抑制miR-509-3p表达可增加ox-LDL诱导的MAEC增殖活性〔(0.64±0.35)%比(0.34±0.20%)%, P<0.05〕, 降低细胞凋亡率〔(13.59±2.22)%比(29.84±5.19)%, P<0.01〕, 同时上调ox-LDL诱导的MAEC Bcl-2 mRNA和蛋白表达(Bcl-2 mRNA相对表达:0.82±0.09比0.52±0.10, Bcl-2蛋白相对表达:0.83±0.17比0.40±0.07, 均P<0.05)。结论 Bcl-2是miR-509-3p靶基因之一。miR-509-3p能够降低内皮细胞增殖活性, 减少Bcl-2表达, 促进细胞凋亡, 从而促进动脉粥样硬化的发生发展。抑制miR-509-3p的表达可能成为动脉粥样硬化潜在的治疗靶点。

• 单位
  天津市胸科医院; 天津市天津医院