诱导型启动子在谷氨酸棒杆菌ATCC13032中调控强度的分析

作者：陈晓雪; 陈飚; 孙兵兵; 蒋宇; 杨晟; 张怡轩

来源：沈阳药科大学学报, 2017, 34(02): 169-175.

DOI：10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2017.02.013

• 谷氨酸棒杆菌
• 诱导型启动子
• β-半乳糖酶
• 报告基因

目的研究诱导型启动子Ptrc、Ptac、Para BAD、Prha、Ptet在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)ATCC13032生长迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期的相对转录强度。方法在待测启动子后连接报告基因β-半乳糖酶基因Lac Z克隆入质粒p MBBL,并转入谷氨酸棒杆菌ATCC13032。取菌体生长迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期四个时期诱导和不诱导的细胞,经超声波粉碎后,检测半乳糖酶的酶活。结果通过菌株生长曲线,确定3、11、24和48 h为菌种生长迟缓期、对数期、稳定期和衰亡期的取样时间点。启动子在不同生长时期转录强度不同,以Ptrc为例,转录强度由强至弱依次为诱导培养24 h>48 h>11 h>3 h;添加诱导剂条件下,培养11 h启动子表达相对强度由强至弱依次是Ptrc>Ptet>Para BAD>Ptac>Prha。结论各种诱导型启动子的表达强度在有无诱导剂的条件下显著不同。

• 单位
  上海生命科学研究院植物生理生态研究所; 中国科学院; 沈阳药科大学