正交设计优化大旗瓣凤仙ISSR-PCR反应体系

作者：赵博; 李景剑; 符支宏; 钟树华

来源：南方农业学报, 2014, 45(02): 184-188.

• 大旗瓣凤仙
• ISSR-PCR
• 反应体系
• 优化
• 正交设计

【目的】优化大旗瓣凤仙ISSR-PCR反应体系,为大旗瓣凤仙遗传多样性分析提供技术参考。【方法】利用正交试验设计对大旗瓣凤仙ISSR-PCR反应体系的5个因素(Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA)4水平进行优化分析,并在此基础上对PCR反应过程中的退火温度进行筛选。【结果】建立了大旗瓣凤仙ISSR-PCR的优化反应体系,即在25.0μL反应体系中含1×PCR Buffer、Mg2+1.5 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.8μmol/L、Taq DNA聚合酶0.751.00 U、模板DNA 100 ng。通过该体系可以筛选出6条对大旗瓣凤仙种群扩增效果较好的引物。【结论】优化的ISSR-PCR反应体系具有较高的稳定性,可用于大旗瓣凤仙及凤仙属植物种群的ISSR遗传多样性分析。

• 单位
  广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所; 广西师范大学; 生命科学学院