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摘要
目的 探究CD73/腺苷/腺苷A2A受体（A2AR）通路在细粒棘球蚴抑制巨噬细胞炎症反应中的作用及机制。方法 取健康C57BL/6小鼠腹腔注射无菌淀粉肉汤（0.5 ml/只），3 d后抽取腹腔液，分离巨噬细胞，以1×106/ml接种于6孔板中，待细胞贴壁后，加入细粒棘球蚴囊液（终浓度0.8 mg/ml）培养0、6、12、18和24 h后，qRT-PCR检测CD73、A2AR、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和精氨酸酶1 (Arg-1)的相对转录水平，流式细胞术检测CD73的表达量，蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测A2AR、细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)和磷酸化的ERK1/2 (p-ERK1/2)的表达量。取分离的巨噬细胞接种于6孔板（1×106个细胞/孔），囊液组、给药组和对照组（每组3孔）分别加入囊液（终浓度0.8 mg/ml）、囊液（终浓度0.8 mg/ml）和药物（腺苷受体抑制剂SCH58261，终浓度50μmol/L），以及等量培养基，培养24 h后，采用qRT-PCR检测TNF-α、Arg-1的相对转录水平，Western blotting检测ERK1/2、p-ERK1/2的表达量。取6～8周龄健康C57BL/6雌鼠，感染组小鼠于肝被膜下注射5 000个细粒棘球蚴原头节（20μl/只），健康组小鼠不作处理。1个月后，两组各取6只小鼠，取肝脏，石蜡包埋后制备切片，HE染色观察肝组织病变情况，免疫组织化学染色检测A2AR的表达情况，流式细胞术检测包囊近端和远端肝组织的CD73表达情况。取感染小鼠，给药组（8只）和溶剂组（8只）小鼠分别腹腔注射腺苷受体抑制剂（SCH58261） 1 mg/（kg·d）和等量的PBS，健康组小鼠（8只）不作处理，22 d后，称量小鼠的体质量，以及肝脏、脾脏、肾脏和心脏的质量，计算各脏器与体质量的比值；取小鼠肝组织，石蜡包埋后制备切片，HE染色观察包囊周围炎性细胞浸润情况。两组间数据比较采用独立样本t检验，多组间数据比较采用单因素方差分析。结果 巨噬细胞经细粒棘球蚴囊液处理后，CD73 mRNA相对转录水平，18 h组（1.66±0.17）和24 h组（2.01±0.15）均高于0 h组（1.00±0.09）(t=3.35,P 0.05）。HE染色结果显示，与溶剂组相比，给药组包囊周围炎性细胞增多。结论 细粒棘球蚴通过诱导巨噬细胞表达CD73和A2AR促进炎症抑制因子的分泌来逃避宿主免疫。
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单位石河子大学医学院第一附属医院; 石河子大学
