tTA/tetO-CCKR-2双转基因模型小鼠鉴定及生存时间分析

作者：高子清; 阮思蓓; 李丽; 凌凤; 唐晓琴; 康清梅; 罗斯译; 罗静; 唐亚平; 唐明希

来源：中国组织工程研究, 2021, 25(11): 1682-1687.

• 双转基因小鼠
• 基因型鉴定
• 原位杂交
• 生存分析
• 焦虑症
• 恐惧行为
• 应激障碍

背景:前脑特异性胆囊收缩素受体2(CCKR-2)双转基因小鼠(tTA/tetO-CCKR-2 tg,简称dtg)是焦虑相关疾病的理想动物模型,但尚缺乏该模型鉴定及寿命相关数据。目的:鉴定dtg小鼠子代DNA及胆囊收缩素受体2转基因前脑特异性表达并分析其生存情况。方法:由α-CaMKII/tTA单转基因小鼠和tetO-CCKR-2单转基因小鼠杂交,构建tTA/tetO-CCKR-2双转基因小鼠模型,取子代鼠尾提取DNA进行基因型鉴定;以野生型小鼠(WT小鼠)做对照,原位杂交特异性识别前脑胆囊收缩素受体2转基因表达;记录2年内dtg和WT小鼠(雌、雄分别各30只)的自然寿命进行生存分析。实验方案经西南医科大学实验动物伦理委员会批准;伦理审批号:20150068。结果与结论:①基因型鉴定:dtg实验小鼠预期基因片段大小与琼脂糖凝胶电泳结果相符;②原位杂交鉴定:dtg小鼠前脑区域呈现强烈的胆囊收缩素受体2杂交信号,而WT小鼠几乎未呈现;③寿命观察:雌、雄dtg小鼠中位生存时间分别为76周和77周,生存率均随小鼠的年龄增长而降低,且均分别显著低于雌、雄WT小鼠(均P <0.001);不同性别dtg小鼠间生存率差异无显著性意义(P=0.577);④结果表明,dtg小鼠可通过鼠尾提取DNA、PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型及原位杂交鉴定胆囊收缩素受体2转基因在前脑特异性表达;tTA/tetO-CCKR-2双转基因诱导可能会缩短小鼠的总体寿命,但对雌、雄dtg小鼠间的影响无显著差异。

• 单位
  广州市妇女儿童医疗中心; 西南医科大学