摘要
目的探究miRNA-26b-5p(miR-26b-5p)靶向调控NFE2L3表达水平影响结直肠癌细胞生长、迁移和侵袭能力的分子机制。方法通过qPCR的方法检测了人正常肠上皮细胞(NCM460)及结直肠癌细胞系(HT29、SW620及HCT116)中miR-26b-5p的表达水平。通过qPCR及western blot检测了上述细胞系中NFE2L3的表达水平。生物信息学方法分析了miRNA-26b-5p与NFE2L3结合的靶向序列。双荧光素酶基因报告实验检测miR-26b-5p对NFE2L3的靶向调控机制。用脂质体法将miR-26b-5p mimic或同时将NFE2L3转染HT29及SW620结直肠癌细胞系中,通过CCK-8及克隆形成实验观察对细胞生长的影响,通过流式细胞术观察凋亡能力的影响,通过Transwell观察细胞迁移和侵袭能力的影响。结果与人正常上皮细胞系相比,在结直肠癌细胞系中miR-26b-5p的表达水平显著下调(P <0.05),而NEF2L3的m RNA水平及蛋白水平则显著上调(P <0.05)。双荧光素酶报道基因实验显示miR-26b-5p能显著影响NEF2L3 3′UTR表达载体的荧光素酶活性(P <0.05)。过表达miR-26b-5p可显著抑制结直肠癌细胞系细胞的生长、克隆形成及迁移和侵袭能力,引起细胞凋亡(均P <0.05),而同时过表达NEF2L3则可抵消miR-26b-5p的对细胞功能的作用(均P <0.05)。结论在结直肠癌中miR-26b-5p低表达,而NEF2L3高表达;miR-26b-5p可靶向调控癌基因EF2L3的表达水平,从而调控结直肠癌细胞的生长、凋亡、迁移和侵袭,参与结直肠癌的发生发展。
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