E3泛素连接酶TRIM50促进口腔鳞状细胞癌增殖及迁移侵袭的分子机制研究

作者：刘琛; 赵许兵; 程政; 马志军^*

来源：山西医科大学学报, 2021, 52(02): 141-151.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2021.02.004

• 口腔鳞状细胞癌
• E3泛素连接酶
• 恶性表型

目的检测E3泛素连接酶(tripartite motif containing 50,TRIM50)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中生物学功能,并探究TRIM50蛋白表达对OSCC细胞恶性表型调控的潜在机制。方法采用蛋白质免疫印迹法检测OSCC细胞Cal27、HSC3、HOK、SCC9以及SCC25中TRIM50蛋白的表达。通过脂质体将搭载TRIM50-Flag表达序列的pc DNA3.1(+)质粒导入SCC9和SCC25细胞,设置空白载体作为过表达实验的空白对照组。同样的方法将TRIM50小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转入Cal27和HOK细胞,设置无义干扰片段作为沉默实验的阴性对照组。然后,通过蛋白质免疫印迹法分别检测TRIM50过表达和沉默后OCSS细胞TRIM50表达水平的变化,再通过细胞计数法统计各组中OSCC细胞在相同的时间内细胞增殖的数目、克隆形成的集落数和迁移侵袭细胞数目的变化。之后,裂解提取OSCC细胞中的总蛋白,并通过TRIM50抗体进行免疫共沉淀鉴定在OSCC细胞中与TRIM50蛋白相互作用的蛋白。结果 OSCC细胞系中,SCC9和SCC25细胞低表达TRIM50,Cal27和HOK细胞高表达TRIM50。在SCC9和SCC25细胞过表达TRIM50后,相比于空白对照组,过表达TRIM50组SCC9和SCC25细胞的增殖数目增多、克隆形成集落数增多和迁移侵袭的细胞数增多(均P <0.05)。在Cal27和HOK细胞中沉默TRIM50后,相比于阴性对照组,沉默TRIM50组Cal27和HOK细胞的增殖数目减少、克隆形成集落数减少和迁移侵袭的细胞数减少(均P <0.05)。TRIM50抗体免疫沉淀OSCC细胞中的TRIM50蛋白后,相比于空白对照组,过表达TRIM50组细胞中视网膜母细胞瘤肿瘤抑制蛋白(retinoblastoma tumor suppressor protein,Rb)与TRIM50蛋白共沉淀。在OSCC细胞中TRIM50过表达后,相比于空白对照组,过表达TRIM50组细胞的Rb蛋白的多聚泛素化水平增加,Rb蛋白的表达水平下降,Rb m RNA的表达水平没有变化。另外,在OSCC细胞中同时过表达TRIM50与Rb蛋白后,相比于空白对照组,TRIM50与Rb共过表达组OSCC细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭数目没有变化(P> 0.05)。结论 TRIM50作为促癌基因增强了OSCC细胞的增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。Rb是E3泛素化连接酶TRIM50所作用的底物蛋白。TRIM50通过促进Rb蛋白的泛素化降解下调其蛋白的表达量,调控OSCC细胞的恶性表型。

• 单位
  西安市第九医院; 西安交通大学