基于流式细胞术的大鼠外周血网织红细胞微核试验方法的建立

作者：刘运杰; 霍娇; 岳茜岚; 朱雪娇; 曾珠; 彭子豪; 陈锦瑶; 张立实^*

来源：现代预防医学, 2019, 46(02): 322-352.

• 微核试验
• 流式细胞术
• 遗传毒性
• 环磷酰胺
• 甲基磺酸乙酯

目的建立基于流式细胞术的大鼠外周血网织红细胞微核试验,检测阳性诱变剂甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulphonate,EMS)和环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)在所建立的试验方法中的表现。方法使用CD71-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记大鼠外周血网织红细胞,核酸染料DRAQ5标记DNA,建立流式细胞术检测方案。采用该方案测定EMS和CP的遗传毒性时,将40只雄性SD大鼠随机分为8组,EMS染毒剂量为0、50、100、200mg/kg.bw,CP为0、5、10、15 mg/kg.bw,间隔24 h2次经口染毒。在给药前1 d和给药后24、48、72、96、120 h取尾静脉血,使用流式细胞术测定外周血网织红细胞和成熟红细胞微核率。结果本试验方法所得历史阴性对照成熟红细胞和网织红细胞背景微核率均数分别为0.04‰和0.42‰,标准差分别为0.02‰和0.18‰。在所建立的试验系统中观察到EMS及CP可诱导外周血网织红细胞微核显著升高。结论本实验室建立的基于CD71-FITC和DRAQ5双染的外周血流式微核技术操作简便快捷,背景微核率较低,检测结果稳定,在化学物的遗传毒性评价方面具有较大的推广价值和良好的应用前景。

• 单位
  四川大学; 公共卫生学院; 四川省疾病预防控制中心