NaHS对ATP诱导大鼠小胶质细胞P2X受体表达的影响

作者：马洁; 郭康; 吕林亚; 李新娟; 王璐; 魏林郁; 赵红岗; 李东亮

来源：中国应用生理学杂志, 2017, 33(06): 519-523.

• 三磷酸腺苷
• 嘌呤能P2X7受体
• 大鼠小胶质细胞
• NaHS

目的:观察硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(Na HS)对ATP致伤的大鼠小胶质细胞细胞活力、细胞膜通透性及P2X7受体表达的影响。方法:实验取对数期形态结构及生长分化良好的大鼠小胶质细胞,随机分4组,每组设3个复孔。(1)正常对照组:常规培养,不进行ATP处理。(2)ATP组:接种细胞24 h后ATP处理。(3)NaHS+ATP组:Na HS预先孵育30 min后再用ATP处理,并且Na HS始终存在于反应体系中。(4)KN-62(P2X7受体阻断剂)+ATP组:KN-62预先孵育30 min,其余同Na HS+ATP组。MTT检测各组细胞活力,荧光染料YO-PRO-1检测各组相对荧光单位(RFU)反映膜的通透性,Western blot检测各组P2X7受体表达水平。结果:(1)与对照组相比,不同浓度的ATP(1、3、5、10 mmol/L)作用3 h均可明显降低大鼠小胶质细胞活力,Na HS(200μmol/L)干预后大鼠小胶质细胞活力较ATP组明显增加(P<0.01),但Na HS达400μmol/L浓度时,其保护作用未进一步增加。(2)随着ATP浓度的增加,大鼠小胶质细胞内YO-PRO-1的荧光强度显著增加,Na HS预处理可明显减少细胞对YO-PRO-1的摄取(P<0.01)。(3)ATP(3 mmol/L)能上调P2X7受体蛋白表达水平,而Na HS(200μmol/L)预孵育则可明显抑制ATP引起的P2X7受体蛋白表达的上调(P<0.01)。结论:Na HS可减少ATP致伤的大鼠小胶质细胞的P2X7受体表达、降低通透性、增加细胞活力,提示调控P2X7受体的表达和功能可能是H2S神经保护作用的重要环节。

• 单位
  新乡医学院第三附属医院; 新乡医学院