卵巢癌中miR-148a通过作用DNA甲基化转移酶1调控细胞黏附分子1基因甲基化的分子机制研究

作者：郑高明; 苏晓茹; 李兰^*

来源：中华内分泌外科杂志, 2021, 15(05): 509-513.

• 卵巢癌
• miRNA-148a
• 细胞黏附分子1
• DNA甲基化转移酶1

目的探讨卵巢癌中细胞黏附分子1(cell adhesion molecule 1, CADM1)基因启动子甲基化对基因转录和蛋白表达水平的影响, 及miRNA-148a对CADM1甲基化水平的调控机制。方法选取2018年6月至2020年6月在杭州师范大学附属医院行手术治疗的86例卵巢癌患者, 定量检测卵巢癌组织和癌旁组织CADM1基因CpG岛甲基化水平;使用定量实时聚合酶链反应检测CADM1基因mRNA和miRNA-148a表达量;采用western blot法检测CADM1基因和DNMT1蛋白水平。使用不同浓度甲基转移酶抑制剂(5-Azacytidine, 5-Aza)处理人卵巢癌SKOV3细胞, 72 h后检测其CADM1 mRNA表达量。将miR-335-5p类似物(analog)、抑制物(inhibitor)和各自阴性对照分别转染入卵巢癌细胞系SKOV3, 然后检测转染后的miR-335-5p表达量和CADM1基因甲基化水平。结果卵巢癌组织的CADM1-1岛的甲基化水平为(2.89±0.82)%, 显著高于癌旁正常组织的甲基化水平(1.86±0.68)%(t=4.936, P<0.001), 卵巢癌组织的CADM1-2岛的甲基化水平为(3.12±0.93)%, 显著高于癌旁正常组织的甲基化水平(2.27±0.69)%(t=5.114, P<0.001);Pearson相关分析表明卵巢癌组织CADM1-1岛和CADM1-2岛的甲基化水平与mRNA相对表达量间均呈显著负相关(r分别为-0.615和-0.582, P均<0.001), 且与CADM1蛋白表达量间也均呈显著负相关(r分别为-0.521和-0.612, P均<0.001);卵巢癌组织中的miRNA-148a相对表达量为1.53±0.42, 显著低于癌旁组织中的miRNA-148a相对表达量2.59±0.73(t=6.113, P<0.001);不同浓度5-Aza处理后, SKOV3细胞CADM1基因在低浓度组和高浓度组的mRNA表达水平均显著高于对照组(P均<0.05), 且高浓度组的mRNA表达水平显著高于低浓度组(P<0.05);miRNA-148a对SKOV3细胞转染后, mimic组的miRNA-148a相对表达量显著升高, inhibitor组的表达量显著降低(P<0.001), 而mimic组的DNMT1表达量和CADM1基因甲基化水平显著降低, inhibitor组的DNMT1表达量和CADM1基因甲基化水平显著升高(P<0.001)。结论在卵巢癌中, miRNA-148a可通过作用下游靶蛋白DNMT1, 调控CADM1基因的DNA甲基化水平, 从而影响CDM1基因的mRNA和蛋白表达水平, 参与卵巢癌的发病机制。

• 单位
  杭州师范大学; 重庆市肿瘤研究所