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摘要
目的建立永生化大鼠前软骨干细胞(PSCs)株,为研究前软骨干细胞的分化机制及临床应用奠定基础。方法用L ipofectam ineTM2000介导基因转染,将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代PSCs进行稳定表达,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养,观察细胞形态及生长状况,绘制细胞生长曲线,用免疫细胞化学方法和RT-PCR鉴定SV40T抗原基因在转染细胞中的表达。结果分离获得转化细胞阳性克隆,用免疫组化证实FGFR-3表达阳性,提取RNA后用RT-PCR法成功扩增出588 bp的片段。转染细胞经扩大培养,命名为永生化前软骨干细胞。贴壁培养的转染细胞群体倍增时间为(22.98±2.77)h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论在体外培养条件下,可以从新生大鼠干骺端分离、培养出前软骨干细胞,pCMVSV40T/PUR转染能使其永生化。
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