Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞残余DNA荧光定量PCR检测方法及其相应质量标准的建立

作者：江征; 刘悦越; 朱文慧; 沈泓; 李炎; 郭航炜; 王剑锋; 英志芳; 王晓娟; 李长贵^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(08): 981-991.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003689

• Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗
• Vero细胞
• 残余DNA
• 荧光定量PCR

目的 建立与国际接轨的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（inactivated poliovirus vaccine made from Sabin strain,sIPV）Vero细胞残余DNA荧光定量PCR(q-PCR)检测方法及相应质量标准。方法 按照《中国药典》三部（2020版）通则3407第三法，选择通则建议的Vero细胞核酸引物和探针，通过优化磁珠法提取核酸以及PCR反应体系和条件，采用q-PCR法Vero细胞DNA定量国家标准品，对sIPV产品进行线性范围、精密度和回收率验证。在此基础上，与国内5家sIPV生产研究企业和2家省药检院协作开展适用性验证的研究，并对检测结果进行统计分析，建立qPCR法检测sIPV成品Vero细胞DNA残留量的可接受限度标准。结果 优化的q-PCR方法在0.002～200 pg/μL范围内呈良好的线性关系，R2=0.999；精密度验证结果试验内、试验间变异系数分别为16.7%和27%；样品回收率在50%～150%范围内，RSD≤30%，符合《中国药典》三部（2020版）通则3407第三法相关要求。协作研究各企业sIPV成品Vero细胞DNA残留量平均为0.07～7.8 pg/剂，检测结果最大值<50 pg/剂，各实验室显示出良好的适用性；用q-PCR法检测已知50 pg Vero细胞核酸标准品（杂交法用），共获得55个有效检测值，统计计算结果为50.00 pg(95%CI:44.00～56.01 pg)，与理论值差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 成功建立了sIPV产品适用的Vero细胞残余DNA q-PCR检测方法，该方法具有良好的适用性，可用于sIPV成品的质量评价，限度标准定为不高于50 pg/剂具有可行性。

• 单位
  国家药典委员会; 中国食品药品检定研究院; 浙江省食品药品检验研究院