摘要
目的探讨微小RNA-29b(miR-29b)在人骨关节炎软骨组织细胞中的表达和对骨关节炎软骨细胞生物学功能影响及其机制。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-29b在人骨关节炎软骨组织细胞和正常骨软骨组织细胞(2018年1月至2019年12月贵州医科大学附属医院骨科手术取样)中表达。培养人骨关节炎软骨细胞, 并分成miR-29b inhibitor组、miR-29b mimics组、Negative Control组和Blank Control组。细胞计数法(CCK-8)和流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;蛋白印迹法(Western blot)和qPCR分别检测各组细胞中Ⅱ型胶原蛋白(Col Ⅱ)、Ⅹ型胶原蛋白(Col Ⅹ)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)蛋白及基因mRNA的表达。组间比较采用单因素方差分析和t检验。结果人骨关节炎软骨组织细胞中miR-29b表达量显著高于正常骨组织(3.21±0.26比1.04±0.06, t=8.355, P<0.05)。48~96 h时, miR-29b inhibitor组骨关节炎软骨细胞吸光度(A)值显著高于Negative Control组(0.59±0.07、0.81±0.07、1.06±0.15比0.43±0.08、0.68±0.07、0.82±0.11, F=5.133、7.155、8.242, P<0.05);miR-29b inhibitor组细胞凋亡率显著低于Negative Control组[(5.23±0.89)%比(10.16±1.55)%, F=11.244, P<0.05];miR-29b inhibitor组细胞中Col Ⅱ蛋白和mRNA表达均显著高于Negative Control组(0.86±0.06比0.46±0.05和1.85±0.05比0.97±0.04, F=4.284、9.545, P<0.05), 而Col Ⅹ、MMP-13蛋白和mRNA表达均显著低于Negative Control组(0.19±0.06、0.35±0.04比0.76±0.04、0.93±0.06)和(0.36±0.04、0.51±0.05比0.96±0.07、0.99±0.06, F=5.299、6.024、6.973、7.111, P<0.05)。结论 miR-29b在人骨关节炎软骨细胞中表达升高, 其促进Col Ⅹ、MMP-13并抑制Col Ⅱ基因mRNA和蛋白表达, 进而发挥抑制人骨关节炎软骨细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。
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