猪SALL1蛋白分子信息分析及基因敲除细胞系制备

作者：李美双; 赵丽华; 李荣凤^*

来源：南京医科大学学报(自然科学版), 2022, 42(07): 941-947.

• 猪
• Sall1
• 蛋白结构
• CRISPR/Cas9
• 猪胎儿成纤维细胞

目的：从巴马小型猪SALL1的蛋白结构出发，分析其与人SALL1蛋白的同源性，进一步制备Sall1基因敲除的巴马小型猪胎儿成纤维细胞系，为通过体细胞核移植技术获得猪肾脏发育缺陷模型提供实验材料。方法：利用生物信息学方法分析人、猪、鼠SALL1的蛋白结构。利用在线设计软件，在猪Sall1基因第1外显子区域设计单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA)并将其连接至PX330质粒，构建猪Sall1基因敲除打靶载体。在初步转染细胞的基础上，通过Sall1基因测序分析验证PX330-sgRNA载体打靶效率，最后将打靶载体转染至原代猪胎儿成纤维细胞（porcine fetal fibroblast,PFF）中，通过药物筛选获得单克隆细胞并鉴定其基因型。结果：生物信息学分析表明，相比小鼠，猪的SALL1蛋白与人SALL1蛋白具有更高的同源性。成功构建猪Sall1基因敲除打靶载体，并获得33个单克隆细胞系，经基因测序鉴定得到16个Sall1双等位基因敲除的细胞系。结论：生物信息学方法验证了人和猪SALL1蛋白具有更高的同源性。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得Sall1基因敲除细胞系，为研究Sall1基因在猪肾脏发育过程中的作用提供研究材料，并为下一步获得猪肾脏缺失模型奠定基础。

• 单位
  南京医科大学; 生殖医学国家重点实验室