视黄酸通过GSK-3β对大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马神经干细胞增殖的调节作用

作者：李思雨; 赵敏; 杨茂玲; 肖农; 江伟^*

来源：吉林大学学报(医学版), 2021, 47(05): 1077-1085.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20210501

• 视黄酸
• 缺氧缺血性脑损伤
• 神经干细胞
• 细胞增殖
• 糖原合酶激酶3β

目的:研究不同浓度视黄酸(RA)对大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后海马神经干细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养原代海马神经干细胞,并进行免疫荧光鉴定,对神经干细胞施以氧糖剥夺(OGD)损伤,模拟体内HIBD损伤。将细胞分为对照组、OGD组(0μmol·L-1RA干预)和不同浓度(0.5、1.0、5.0、10.0和50.0μmol·L-1) RA干预组,CCK-8法检测OGD后12、24、48和72 h各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR (RT-q PCR)法和Western blotting法检测各组细胞中视黄酸核受体α(RARα)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)和G1/S-特异性周期蛋白-D1 (Cyclin D1) m RNA表达水平和蛋白表达量。利用GSK-3β抑制剂CHIR99021处理不同浓度(0、0.5、5.0和50.0μmol·L-1) RA干预后的海马神经干细胞,将细胞分为对照组,5.0μmol·L-1RA干预组,0、0.5、5.0和50.0μmol·L-1RA+20μmol·L-1CHIR99021干预组,CCK-8法检测OGD后24 h细胞增殖率,RT-q PCR法和Western blotting法检测各组细胞中RARα、GSK-3β和Cyclin D1 m RNA表达水平和蛋白表达量。结果:免疫荧光鉴定,成功提取并培养原代海马神经干细胞。RA干预后的CCK-8法检测,与OGD组比较,1.0和5.0μmol·L-1RA干预组在OGD后各时间点细胞增殖活性均明显升高(P<0.05);RT-q PCR法和Western blotting法检测,与OGD组比较,5.0和10.0μmol·L-1RA干预组细胞中RARα、GSK-3β和Cyclin D1 m RNA表达水平明显升高(P<0.05),1.0、5.0和10.0μmol·L-1RA干预组RARα和GSK-3β蛋白表达量增加。加入GSK-3β抑制剂CHIR99021干预后CCK-8法检测,与5.0μmol·L-1RA干预组比较,5.0μmol·L-1RA+20μmol·L-1CHIR99021干预组细胞增殖率明显降低(P<0.01);RT-q PCR法和Western blotting法检测,与5.0μmol·L-1RA干预组比较,0和0.5μmol·L-1RA+20μmol·L-1CHIR99021干预组细胞中RARαm RNA表达水平明显降低(P<0.01),0、0.5、5.0和50.0μmol·L-1RA+20μmol·L-1CHIR99021干预组细胞中GSK-3β和Cyclin D1 m RNA表达水平均明显降低(P<0.05),GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达量减少。结论:RA促进HIBD损伤后神经干细胞增殖存在适宜浓度窗,其机制可能是RA通过激活GSK-3β调节Cyclin D1的转录,进而促进神经干细胞增殖。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院