马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备

作者：白宇; 童铁钢; 刘光亮; 肖一红; 王群; 徐树兰; 张维军; 吴东来

来源：中国预防兽医学报, 2007, (11): 878-882.

• 马γ-干扰素
• 表达
• 纯化
• 多克隆抗体 equine IFN-gamma
• expression
• purification
• polycolonal antibody

采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441bD,含一...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所