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摘要
【目的】探究环境胁迫因子对猪源多重耐药大肠杆菌生存适应性的影响，为创造多重耐药菌株带来高适应代价的环境及加速降低种群耐药水平提供理论依据。【方法】以分离自贵州省规模化猪场的多重耐药大肠杆菌QL15为研究对象，以大肠杆菌质控（敏感）菌株ATCC25922为对照，经体外竞争试验测定不同环境（培养基浓度、碳源、氮源、pH和温度）胁迫下耐药菌株QL15相对于敏感菌株ATCC25922的适应性，并通过重测序变异位点和实时荧光定量PCR测定分析耐药基因表型及外排泵和外膜孔道蛋白基因表达与细菌适应性代价的关系。【结果】耐药菌株QL15在体外独立及混合培养时，除在稀释LB培养基（1/4、1/8和1/16）中的长势较敏感菌株ATCC25922低外，在低碳源（0.1%和0.5%）、低氮源（0.01%和0.05%）、酸碱性（p H=5.0、pH=6.0和pH=8.0）及低温（20℃）和高温（42℃）胁迫下的生长均优于敏感菌株ATCC25922，且混合培养结果优于独立培养。将耐药菌株QL15基因组序列与敏感菌株ATCC25922基因组序列进行比对，共检测到509个InDel突变位点，其中Delete突变位点233个、Insert突变位点276个；共注释到71个功能基因，以细胞壁与细胞膜相关基因突变最多（10个），占14.1%。与敏感菌株ATCC25922相比，耐药菌株QL15在不同环境胁迫下其外排泵与外膜孔道蛋白相关基因emr B、acr B、tol C和omp C呈下调表达，而omp F基因呈上调表达。【结论】多重耐药大肠杆菌耐药性的获得促使其具有更强的适应性，但对可直接利用营养物质的获取弱于敏感菌株，即处于竞争劣势。耐药大肠杆菌的多重耐药性主要是由多种外排泵和外膜孔道蛋白介导完成，其中，omp F基因在pH胁迫、全营养胁迫和高、低温胁迫下均处于上调表达状态，故推测omp F基因的高表达有利于大肠杆菌在上述胁迫条件下生长。
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单位动物科学学院; 贵州大学; 生命科学学院
