盐酸去氢骆驼蓬碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及自噬的影响

作者：西仁阿依·西热甫; 雷秀英; 张瑜; 伊力亚斯·艾萨; 木塔力甫·艾买提; 陈倩; 冯学召; 李飞^*; 米娜^*

来源：中国药理学与毒理学杂志, 2020, 34(11): 825-831.

DOI：10.3867/j.issn.1000-3002.2020.11.004

• 盐酸去氢骆驼蓬碱
• SH-SY5Y细胞
• 细胞凋亡
• 自噬

目的探讨盐酸去氢骆驼蓬碱(HMH)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及自噬的影响。方法 (1) SH-SY5Y细胞分别加入HMH 10,20,40,80和160μmol·L-1或DMSO(细胞对照组)孵育24 h,通过MTT实验检测SH-SY5Y细胞存活率;Hoechst33342/PI染色法观察细胞凋亡;Western印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3、活化的胱天蛋白酶3及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和P62的表达。(2) SH-SY5Y细胞分别加入HMH(2和4μmol·L-1)或DMSO孵育14 d,检测SH-SY5Y细胞克隆形成率。(3) HMH 40μmol·L-1单独或与3-甲基腺嘌呤(3-MA)5 mmol·L-1同时加入SH-SY5Y细胞,分别培养4或24 h后,Western印迹法检测LC3B-Ⅱ蛋白的表达。(4)将SH-SY5Y细胞分别加入HMH40μmol·L-1或溶剂孵育24 h后,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p-mTOR的表达。结果 (1)与细胞对照组相比,药物作用24 h后HMH 20～160μmol·L-1组细胞存活率降低(P<0.01),凋亡细胞增多,LC3B-Ⅱ蛋白的相对表达量及Bax/Bcl-2的比值增加(P<0.05,P<0.01),P62蛋白的相对表达量减少(P<0.01)。HMH 40～160μmol·L-1组活化的胱天蛋白酶3/胱天蛋白酶3的比值增加(P<0.05)。(2)与细胞对照组相比,药物作用14 d后,HMH 2和4μmol·L-1组细胞克隆形成率降低(P<0.01)。(3) HMH与3-MA同时孵育24 h后,细胞LC3B-Ⅱ的相对表达量比HMH 40μmol·L-1单独处理组降低(P<0.05)。(4)与细胞对照组相比,HMH 40μmol·L-1组Akt和mTOR的磷酸化水平均降低(P<0.05)。结论 HMH通过抑制Akt/mTOR通路抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖,诱导凋亡与自噬。

• 单位
  新疆医科大学; 中国药科大学; 中心实验室; 新疆医科大学第一附属医院; 基础医学院