HABP1基因慢病毒干扰和表达载体的构建及表达

作者：苑博; 张晓芳; 陈雅婧; 田芳; 闫雪苗; 刘运德; 岳丹

来源：临床检验杂志, 2013, 31(10): 782-785.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2013.10.001

• 透明质酸结合蛋白1
• 肾癌细胞
• 慢病毒载体

目的构建慢病毒介导的透明质酸结合蛋白1基因(HABP1)干扰载体及表达载体,建立HABP1降表达及过表达的稳定肾癌细胞系786-0。方法合成人HABP1基因短发夹RNA(shRNA)干扰序列,与慢病毒载体pLKO.1-TRC连接产生重组质粒pLKO.1-shHABP1;双酶切质粒pCDNA3.1(-)-HABP1-Flag,将目的基因片段连接到pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上,组成重组表达载体pCDH-HABP1;酶切鉴定及DNA测序后,转染293T细胞,收集慢病毒颗粒感染786-0细胞,嘌呤霉素筛选稳定细胞系,western blot验证HABP1蛋白的表达水平。结果构建成干扰载体pLKO.1-shHABP1及表达载体pCDH-HABP1;与随机序列对照组比较,pLKO.1-shHABP1转染的786-0细胞HABP1表达水平(0.30±0.01)明显降低(t=25.98,P<0.05),pCDHHABP1转染786-0细胞后,HABP1的表达水平(3.20±0.40)明显升高(t=10.34,P<0.05)。结论成功构建HABP1基因的干扰载体及表达载体,且786-0细胞可稳定降表达及过表达HABP1。

• 单位
  天津医科大学; 天津医科大学总医院