利用Cre/loxP系统构建无标记的htrA基因缺失的变链菌突变株

作者：张文娟; 于丹妮; 韩育植; 任志明

来源：天津医药, 2011, (02): 108-111.

• 链球菌
• 变异
• 丝氨酸内肽酶类
• 整合酶类
• 重组
• 遗传
• 基因缺失
• 聚合酶链反应
• 质粒 Streptococcus mutans serine endopeptidases integrases recombination
• genetic gene deletion polymerase chain reaction plasmids

目的:利用Cre/loxP位点特异性重组系统构建口腔变异链球菌htrA基因缺陷株,并删除选择标记。方法:PCR扩增变链菌的htrA基因片段并克隆到pGEM-T-EasyTA载体。随后插入卡那霉素(Km)抗性基因盒(loxP-Km-loxP)并替换htrA基因的部分序列,使htrA基因失活,构建出htrA基因缺失的同源重组载体pIB△htrA-Km。将该质粒电转化变链菌标准株,抗生素筛选出发生同源重组的菌株,再用含cre基因的热敏质粒pCrePA电转化,删除Km抗性基因。在限制性温度下培养,消除质粒pCrePA,获得无标记的变链菌htrA基因缺陷株,经PCR及DNA测序鉴定。结果:PCR及DNA...

• 单位
  天津医科大学第二医院