M2型巨噬细胞高表达乳脂球表皮生长因子8促进脐静脉内皮细胞增殖和迁移

作者：邝莉雯; 李恭驰; 张晨晨; 申利; 王知; 李炳辉^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(12).

• 巨噬细胞
• 脐静脉内皮细胞
• 条件培养基
• 乳脂球表皮生长因子-8

目的探讨不同亚型巨噬细胞条件培养基对脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物学功能影响及机制。方法将巨噬细胞RAW264.7分为M0、M1、M2和si-乳脂球表皮生长因子-8(MFG-E8)组。M0型巨噬细胞不做处理;M1型巨噬细胞采用脂多糖(LPS, 100 ng/ml)及γ-干扰素(IFN-γ, 10 ng/ml)联合刺激;M2型巨噬细胞使用白细胞介素(IL)-4(10 ng/ml)诱导;si-MFG-E8组通过小干扰寡核苷酸(siRNA)沉默MFG-E8的表达。诱导48 h后免疫荧光法鉴定巨噬细胞极化, 实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证siRNA敲降效率, 并收集各组巨噬细胞条件培养基;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组巨噬细胞及其条件培养基中MFG-E8的表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组巨噬细胞条件培养基对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测各组巨噬细胞条件培养基对脐静脉内皮细胞迁移能力的影响;RT-PCR检测各组的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)分子的表达水平。组间比较采用非配对t检验。结果免疫荧光法鉴定巨噬细胞成功极化为M1和M2型。RT-PCR验证与si-NC比较, si-MFG-E8组MFG-E8 mRNA的表达含量明显降低(t=63.070, P<0.01)。ELISA实验结果显示, 与M0组比较, M2组巨噬细胞MFG-E8明显增高, M1及si-MFG-E8组明显降低(t02=14.050, P02<0.01;t01=28.120, P01<0.01;t0si=48.690, P0si<0.01);与M0组比较, M2组巨噬细胞条件培养基中MFG-E8明显增高, M1及si-MFG-E8组明显降低(t02=17.240, P02<0.01;t01=16.350, P01<0.01;t0si=36.260, P0si<0.01)。CCK-8实验结果显示, 与M0组比较, 经M2型巨噬细胞条件培养基处理的HUVECs的增殖能力明显增加, M1及si-MFG-E8组明显下降(t02=7.563, P02<0.01;t01=4.365, P01<0.01;t0si=5.965, P0si<0.01)。Transwell实验结果显示, 与M0组比较, 经M2型巨噬细胞条件培养基处理的HUVECs的迁移能力明显增加, M1及si-MFG-E8组明显下降, (t02=5.339, P02<0.05;t01=2.991, P01<0.05;t0si=6.275, P0si<0.01)。RT-PCR实验结果显示, 与M0组比较, 经M2型巨噬细胞条件培养基处理的HUVECs细胞PI3K、Akt和mTOR分子的表达水平明显升高, M1及si-MFG-E8组明显下降(PI3K:t02=5.393, P02<0.01;t01=4.35, P01<0.05;t0si=4.718, P0si<0.05;Akt:t02=4.849, P02<0.05;t01=2.285, P01>0.05;t0si=2.628, P0si>0.05;mTOR:t02=6.128, P02<0.01;t01=2.659, P01>0.05;t0si=2.663, P0si>0.05)。结论 M2型巨噬细胞高表达MFG-E8, 并可能通过上调PI3K、Akt和mTOR分子表达水平, 促进脐静脉内皮细胞增殖和迁移。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院; 华中科技大学同济医学院附属梨园医院