低氧处理增强体外培养小鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移能力

作者：沈慧; 张丽娜; 姚德山; 张振刚; 龚开政^*

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2019, 35(01): 39-45.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.008741

• 组织贴块法
• 低氧
• 肺动脉平滑肌细胞(PASMC)
• 增殖
• 迁移

目的改良并建立小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)原代培养方法,探讨低氧条件对其增殖、迁移及凋亡的影响。方法无菌条件下分离肺动脉,胰蛋白酶酶解组织贴块法体外培养PASMC。倒置相差显微镜观察细胞形态、细胞计数法绘制细胞生长曲线;采用α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色法鉴定细胞类型及纯度;运用CCK-8法检测不同氧含量对细胞增殖活力的影响,在低氧条件下,划痕实验检测细胞迁移能力, Western blot法检测细胞BAX蛋白水平。结果培养的原代PASMC呈长梭形,具有典型的"峰-谷"状, 9 d后细胞生长迅速呈单层致密排列,细胞生长曲线近似"S"形;α-SMA阳性的细胞可达96%。与常氧组相比,缺氧组在各时间点的PASMC增殖活性和迁移距离均明显增加,在10 mL/L氧含量条件下细胞增殖和迁移活力最强,细胞BAX蛋白水平也明显降低,且具有时间依赖性。结论采用酶解组织贴块法可获取高纯度高活力的原代PASMC,在10 mL/L氧含量条件下细胞增殖和迁移活力强,不易凋亡。