三氟拉嗪上调叉头框蛋白O1表达对MRL/lpr狼疮肾炎小鼠的保护作用

作者：王宝栋; 李梅; 渠风琴; 王小健; 李荣山^*

来源：中华风湿病学杂志, 2023, 27(11).

• 三氟拉嗪
• 细胞周期
• 叉头框蛋白O1
• 细胞增殖

目的探讨三氟拉嗪通过叉头框蛋白O1(FoxO1)的表达对系膜细胞增殖的影响及对狼疮肾炎(LN)小鼠的保护作用。方法体外实验:利用二苯四氮唑溴盐(MTT)法检测不同浓度三氟拉嗪对系膜细胞的增殖情况的影响;流式细胞术检测不同浓度三氟拉嗪对系膜细胞周期的影响;蛋白质印迹法(WB法)检测不同浓度三氟拉嗪对系膜细胞FoxO1、细胞周期蛋白(cyclinD1)表达的影响, 及增强或抑制FoxO1表达后, 三氟拉嗪对系膜细胞、cyclinD1, P21的表达;体内实验:通过苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学、WB法检测三氟拉嗪对MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞增殖情况, ELISA方法检测三氟拉嗪对LN小鼠肾功能的影响, WB法检测三氟拉嗪对系膜细胞所分泌基质纤维连接蛋白(FN), Ⅰ型胶原蛋白(Col1)表达水平。计量资料组间比较采用重复测量方差分析和单因素方差分析, 进一步两两比较采用Bonferroni法。结果三氟拉嗪抑制系膜细胞的增殖, 组间、时间及组间×时间的交互效应均有统计学意义(F组别=162.58, F时间=50.84, F交互=19.12, P均<0.001), 呈现出浓度依赖性;流式细胞术结果显示, 不同浓度的三氟拉嗪处理系膜细胞后, G0/G1期的细胞百分比逐渐增加, 而S期的细胞逐渐减少, 这种效应具有剂量依赖性, 差异具有统计学意义(P<0.05);WB法结果证明, 三氟拉嗪抑制cyclinD1的表达(2.17±0.34, 1.49±0.20, 1.11±0.27, 0.15±1.55, F=33.60, P<0.001), 上调FoxO1的表达(0.81±0.45, 2.31±0.81, 3.51±0.52, 5.13±10.07, F=35.63, P<0.001), 且具有剂量依赖性;体内实验结果表明:肾脏病理提示三氟拉嗪可以抑制LN小鼠系膜细胞的增殖, 差异具有统计学意义(F=8.47, P=0.007), ELISA法表明三氟拉嗪并对肾功能具有一定的保护作用[血肌酐:正常组(144±23)μmol/L, LN组(237±14)μmol/L, LN+三氟拉嗪组(211±36)μmol/L, F=20.47, P<0.001, 尿素氮:正常组(22.84±0.56)μmol/L, LN组(19.99±0.92), LN+三氟拉嗪组(13.57±0.25)μmol/L, F=331.96, P<0.001], 且通过WB法证明三氟拉嗪可抑制FN、Col1的表达, 差异具有统计学意义(FFN=1 312.83, FCol1=171.16, P<0.001)。结论三氟拉嗪通过增加FoxO1的表达阻滞系膜细胞周期于G0/G1期, 抑制细胞增殖, 可能对LN具有一定治疗作用。

• 单位
  山西省人民医院; 山西省中西医结合医院