定点突变提高醇脱氢酶LkTADH催化制备他汀关键手性砌块的酶活

作者：陈方; 徐刚; 杨立荣; 吴坚平^*

来源：中国生物工程杂志, 2018, 38(09): 59-64.

DOI：10.13523/j.cb.20180909

• 醇脱氢酶
• (S)-6-氯-3-羰基-5-羟基己酸叔丁酯
• 不对称合成
• 分子改造
• 饱和突变

(S)-6-氯-3-羰基-5-羟基己酸叔丁酯[(S)-CHOH]是他汀类药物合成的关键手性中间体。利用醇脱氢酶催化6-氯-3,5-二羰基己酸叔丁酯不对称合成(S)-CHOH是很有潜力的制备路线,目前存在的主要问题是醇脱氢酶催化活性较低。首先对来源于Lactobacillus kefir DSM 20587的醇脱氢酶的四点突变体LkTADH(A94T/F147L/A202L/L199H)进行回复突变,确定了关键位点147和202,并获得比酶活提高1倍的突变体MF147L-A202L。对这两个位点进行饱和突变,获得比酶活比LkTADH提高1.47倍的突变体MF147I-A202L。其比酶活为10.17U/mg,为目前文献报道最高水平。通过动力学分析和分子对接,分析了突变位点对酶活影响的机制,为后续研究奠定了良好的基础。

• 单位
  生物工程学院; 浙江大学