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摘要
目的:观察RNA干扰对子宫内膜癌JEC细胞DKK1基因表达及生物学功能的影响。方法:用3种RNAi(DKK-homo-366、DKK-homo-811、DKK-homo-886)抑制JEC细胞中DKK1的表达,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测干扰效果。实验分组:正常对照组(正常胎牛血清培养的JEC细胞)、NC对照组(转染无意义序列的RNA片段)和siRNA组(转染DKK-homo-811干扰片段)。Transwell小室、MTT、流式细胞仪分别检测干扰前后细胞侵袭、迁移、增殖和细胞凋亡的变化。结果:real-time PCR(RT-PCR)和Western blot结果显示,siRNA组的DKK1表达显著低于正常对照组和NC对照组(P<0.05);而后两组比较则无显著差异(P>0.05)。Western blot结果显示,正常对照组、NC对照组和siRNA组中β-catenin蛋白表达分别为0.308±0.035、0.305±0.026和0.552±0.018;siRNA组显著高于正常对照组和NC对照组(P<0.05)。Transwell小室检测结果显示,干扰DKK1可降低JEC的侵袭、迁移能力。MTT显示,siRNA组吸光度值显著低于NC对照组和正常对照组(P<0.05);后两组则无显著差异(P>0.05)。siRNA干扰后,siRNA组的细胞凋亡率[(7.34±0.23)%]显著高于NC对照组[(2.24±0.05)%]和正常对照组[(1.62±0.17)%](P<0.05);后两组则无显著差异(P>0.05)。结论:干扰DKK1可降低JEC的侵袭和增殖能力,促进细胞凋亡。DKK1基因在子宫内膜癌JEC细胞中可能发挥促癌作用。
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