弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试

作者：李月玥; 刘先凯; 冯尔玲; 王恒樑; 陈福生; 朱力

来源：军事医学, 2012, (05): 345-350.

• 志贺菌
• 弗氏
• 赖氨酸营养缺陷型突变株
• 基因缺失
• λ-Red重组系统
• 双向电泳
• SILAC Shigella flexneri
• lysine auxotrophic mutant
• gene deletion
• λ-Red recombination system
• two-dimensional gel electrophoresis
• SILAC

目的构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记(SILAC)技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础。方法采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型测评和毒力评价,并利用双向电泳技术比较二者在全菌蛋白表达谱上的差异,最后将突变株分别在含有12C6-赖氨酸和13C6-赖氨酸的培养基中培养,根据双向电泳胶图取对应蛋白点进行胶内酶切及MALDI-TOF/TOF分析。结果成功构建了301 lysA基因缺失突变株,蛋白鉴定结果显示所取对应蛋白点为同一蛋白,在质谱图上轻重同位素峰位移为6 amu。结论本研究所构建...

• 单位
  军事医学科学院; 华中农业大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室