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摘要
目的 分析小鼠感染肝毛细线虫后肝脏microRNA (miRNA)的表达谱，筛选差异表达miRNA，为肝毛细线虫感染致肝纤维化机制研究提供资料。方法 6只雄性BABL/c小鼠随机分为肝毛细线虫感染组和对照组，每组3只。感染组小鼠经灌胃感染肝毛细线虫感染期虫卵（20个卵/鼠），对照组灌胃等量生理盐水。感染后35 d分别取感染组和对照组小鼠的肝组织，进行组织切片、苏木精-伊红（HE）染色后，镜下观察肝组织病变情况。提取和纯化小鼠肝组织总RNA进行文库构建和miRNA高通量测序。通过生物信息学分析筛选差异表达的mi RNA，预测其靶基因并进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对部分差异表达miRNA进行验证分析。结果 肝组织切片的HE染色结果显示，感染组小鼠肝组织呈虫卵肉芽肿性病变，伴有明显的炎性细胞浸润；对照组肝细胞形态完整，未见炎性细胞浸润、变性坏死和纤维化。通过miRNA测序，筛选出差异表达的miRNA共16条，4条表达上调，且均上调2倍以上，其中mmu-miR-129-5p上调4倍以上；12条表达下调，均下调0.5倍以下，其中mmu-miR-21a-3p下调0.1倍以下。mi RNA靶基因GO功能分析显示，富集的基因主要参与了信号转导、蛋白连接、转化酶活性、 G蛋白偶联受体通路、细胞凋亡的负向调控、细胞增殖的正向调控、转录调控等；KEGG通路分析显示，富集的信号通路主要有Hippo信号通路、 Ras信号通路、 mTOR信号通路、磷脂类信号通路、 Wnt信号通路。qRT-PCR检测结果显示，感染组2个上调基因mmu-miR-21a-3p和mmu-miR-181a-1-3p的相对表达水平分别为0.70±0.30和0.68±0.27, 2个下调基因mmu-miR-409-5p和mmu-miR-129-5p的相对表达水平分别为1.27±0.24和2.61±0.52，与参考基因相比表达水平均与测序结果趋势一致。结论 肝毛细线虫感染导致小鼠肝组织miRNA表达谱发生了改变，mmu-miR-409-5p和mmu-miR-129-5p等基因可能是参与肝纤维化的候选基因。
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单位河南省疾病预防控制中心
