稳定表达小鼠CD40L的NIH3T3细胞系的建立及其在B细胞培养和激活中的应用

作者：郎巧利; 何琦琳; 黄楠; 余琳; 杨希^*

来源：中国细胞生物学学报, 2020, 42(01): 118-124.

• 鼠CD40L
• 稳定转染
• NIH3T3细胞
• 饲养细胞

该研究构建小鼠CD40L真核表达重组质粒pcDNA3.1-mCD40L,通过电转法将重组质粒转至NIH3T3细胞中。利用G418对转染后细胞进行压力筛选,获得稳定转染细胞株。提取稳定转染细胞株RNA,通过RT-PCR法检测Neo基因的mRNA表达情况。分离稳定转染细胞上清,利用ELISA法检测小鼠CD40L蛋白水平的表达情况。RT-PCR结果显示,Neo基因能够在稳定转染细胞中表达,ELISA结果显示,获得的稳定转染细胞株NIH3T3-mCD40L细胞上清中CD40L的表达量高达1.286 ng/mL。进一步活性研究表明,该细胞系能够在体外与IL-2和IL-21共同作用培养B细胞至14天,并刺激B细胞产生特异性抗体。该细胞系的成功构建,为利用体外B细胞分离培养和活化法分离特异性单克隆抗体奠定了良好的基础。

• 单位
  农业部; 重庆市畜牧科学院