结核分枝杆菌Ag85B的基因克隆及表达

作者：李晓恒; 吴少庭; 付小强; 甘燕; 王芳; 雷蕾

来源：中国病原生物学杂志, 2009, 4(02): 85-87+94.

DOI：10.13350/j.cjpb.2009.02.009

• 结核分枝杆菌
• Ag85B
• 基因克隆
• 蛋白表达

目的克隆结核分枝杆菌Ag85B基因,在大肠埃希菌中进行表达,获得纯化的重组Ag85B蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增Ag85B基因,以质粒PET23a(+)为表达载体构建Ag85B重组质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE电泳和Western blot技术分析鉴定Ag85B蛋白表达,采用Novagen公司生产的HisBind蛋白纯化试剂盒纯化Ag85B蛋白。结果构建了具有正确基因序列的Ag85B重组表达质粒,经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白分子质量单位约为33ku,Western blot鉴定能被抗His单抗识别,该重组Ag85B蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)中以包涵体形式存在。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,纯化的重组Ag85B蛋白为进一步的研究与应用奠定了基础。

• 单位
  深圳市疾病预防控制中心; 华中科技大学同济医学院