慢病毒载体构建小鼠CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞系

作者：熊玮; 董少红; 张键; 李江华; 吴美善; 廖碧红; 庞新利; 罗林杰

来源：中国组织工程研究, 2015, 19(20): 3195-3199.

DOI：10.3969/j.issn.2095-4344.2015.20.015

• 肌细胞
• 平滑肌
• 趋化因子类
• RNA干扰
• 组织构建
• 组织工程
• 血管平滑肌细胞
• 趋化素
• CMKLR1
• 慢病毒

背景:趋化素在动脉粥样硬化时的表达水平上调,趋化素及其受体CMKLR1可能参与了动脉粥样硬化的病理过程。目的:建立CMKLR1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株。方法:以小鼠CMKLR1基因mR NA序列作为干扰靶点,设计3组靶向CMKLR1基因的shR NA序列,构建慢病毒载体,筛选出干扰最佳的shR NA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用real-time PCR检测感染慢病毒后细胞中CMKLR1 mR NA水平。结果与结论:基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为8.7×106 TU/m L,p LVX-sh RNA3对CMKLR1基因的抑制效果最显著(P<0.001)。将p LVX-shR NA3转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中CMKLR1 mR NA水平,该细胞株中CMKLR1 mR NA水平显著下降(P<0.001),表明慢病毒介导的si RNA可有效沉默小鼠血管平滑肌细胞中CMKLR1基因的表达。

• 单位
  暨南大学; 深圳市人民医院; 中国科学院深圳先进技术研究院; 第二临床医学院