基因工程重组表达血管内皮生长因子的纯化与初步应用

作者：陈媛琴; 田竣元; 黄娟; 蔡威; 吴玉水^*

来源：海峡药学, 2023, 35(02): 53-57.

• 血管内皮生长因子
• 雷珠单抗
• 纯化
• ELISA

目的 血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)可有效促进血管新生和增加血管通透性，是参与多种生理和病理过程的重要因子。通过基因工程重组表达VEGF165a并进行蛋白纯化，同时建立免疫学活性检测方法，可用于检测开发的生物类似药雷珠单抗的药物活性。方法 通过对基因工程构建的rhVEGF165a工程菌进行均质破菌，得到不可溶的包涵体，并进行包涵体的增溶与变性。通过镍柱亲和层析方法，从尿素溶解的包涵体中有效地复性和纯化rhVEGF165a。以纯化的rhVEGF165a建立ELISA分析方法，用于所开发的生物类似药雷珠单抗活性检测。结果 纯化后的rhVEGF165a为天然的二聚体形式，分子量约为40kDa;成功获得纯度达到95%以上的rhVEGF165a蛋白；间接ELISA结果表明，所研发的生物类似药雷珠单抗与原研雷珠单抗具有相同的药物活性。结论 本研究所获得的纯化rhVEGF165a蛋白以及建立的间接ELISA检测方法，可用于开发的生物类似药雷珠单抗的药物活性分析。