表达绿色荧光蛋白重组乳酸杆菌的构建及电击转化条件

作者：田兴山; 张玲华; 周风珍; 李国立; 孙晓刚

来源：华南农业大学学报, 2005, (03): 117-119.

• 绿色荧光蛋白
• 重组乳酸杆菌
• 质粒构建
• 电击 green fluorescent protein
• recombinant Lactobacillus
• plasmid construction
• electroporation

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组乳酸杆菌.将pGFP2质粒中的绿色荧光蛋白基因切下,克隆进表达载体质粒pThioHisB的NcoⅠ和SacⅠ位点之间,构建成重组表达质粒pThioGFP,然后转化大肠杆菌BL21.从BL21中提取重组质粒,用电击法转化乳酸杆菌Lac1001,当细菌处于D600nm为0.6的生长期时,使用PEB作为电击缓冲液,对100μL体积的细胞悬液在电容25μF,电阻200Ω,电压2.2kV的电击条件进行完整质粒转化可得到较高的转化率.电击转化后Lac1001于LB培养基上呈绿色,在荧光透射仪下观察,整个菌体发绿色荧光.构建的重组乳酸杆菌能够稳定表达绿...

• 单位
  华南理工大学; 广东省农业科学院农业生物技术研究所; 生物工程学院