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摘要
观察积雪草苷（asiaticoside,Ass）对氧糖剥夺/再复（oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）损伤的H9C2心肌细胞的增殖、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B （Akt）/Bcl-2同源结构域蛋白（Beclin-1）信号通路的干预作用,探讨其对H9C2心肌细胞的影响。选用H9C2心肌细胞作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）法检测H9C2细胞活性。将H9C2细胞分成对照组、OGD/R组、Ass低浓度组(10μmol·L-1)、Ass高浓度组(80μmol·L-1)和Ass高浓度+氯喹组(80μmol·L-1+50μmol·L-1)。对照组于正常条件下培养,其余各组在处理后进行氧糖剥夺4 h/再复2 h。酶联免疫吸附法检测细胞上清液中天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶（creatine kinase,CK）的含量;免疫荧光观察药物对细胞数量的影响;自噬染色检测试剂盒观察细胞自噬;分子对接技术确定Ass分子靶点;蛋白质印迹法检测PI3K、Akt、选择性自噬接头蛋白（P62）、Beclin-1的表达水平。与OGD/R组相比,Ass各组在10～80μmol·L-1具有保护作用,AST、LDH和CK的含量均降低,PI3K、Akt、P62和Beclin-1蛋白表达水平降低。与Ass组相比,Ass高浓度+氯喹组的AST、LDH和CK的含量均降低,PI3K、Akt、Beclin-1和P62蛋白表达水平均降低。免疫荧光显示抑制剂组、各给药组与模型组相比均具有不同程度的保护作用。综上所述,积雪草苷能够降低OGD/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,降低AST、LDH、CK含量和P62蛋白水平,减少细胞自噬,这可能与其抑制PI3K/Akt/Beclin-1信号通路激活密切相关。
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